瀕危植物香果樹(Emmenopterys henryi)SRAP反應(yīng)體系的建立與引物篩選
論文作者 | 牛艷麗1*、彭焱松1、宋莉1、周賽霞1、魏宗賢1、宋滿珍1、黃江1、張平賢2、高浦新1、杜娟1、虞志軍1 |
刊物 | 分子植物育種 |
刊號 | 2017,15（8）：3136-3144 |
摘要 | 以珍稀瀕危植物香果樹（Emmenopterys henryi）基因組DNA為研究對象,對影響SRAP-PCR反應(yīng)的因素如Mg2+濃度、d NTPs濃度、Taq DNA聚合酶、引物濃度4因素進(jìn)行優(yōu)化。確定香果樹SRAP反應(yīng)體系為:20μL PCR反應(yīng)體系,50 ng模板DNA,1×Buffer,2.5 mmol/L Mg2+,1 U Taq聚合酶,0.3 mmol/L d NTPs,正向和反向引物各0.3μmol/L;在香果樹2份樣品中進(jìn)行引物初篩,利用已發(fā)表的SRAP引物,選取8條正向引物和8條反向引物,共計(jì)64對引物。從中篩選出10對重復(fù)性好,譜帶清晰且穩(wěn)定的引物。并將這些引物在香果樹2個(gè)野生居群20份樣品中進(jìn)行遺傳多樣性分析,共得到72條擴(kuò)增譜帶,其中多態(tài)性譜帶60條,多態(tài)性比率83.3%,平均每個(gè)引物組合產(chǎn)生6個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),供試材料間遺傳變異相對豐富。 |
